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操作半制備液相色譜儀時需要注意以下幾個關鍵步驟

更新時間:2024-11-11瀏覽:2378次

  半制備液相色譜儀是一種用于分離和純化復雜混合物的儀器,尤其適用于天然產物、藥物中間體、生物大分子等物質的純化。它結合了分析型液相色譜的分析能力和制備色譜的純化能力,是實驗室研究中不能少的設備之一。
  操作半制備液相色譜儀時需要注意以下幾個關鍵步驟:
  準備工作:
  確保所有需要使用的溶劑都是高效液相色譜(HPLC)級別,并經過過濾和脫氣處理。
  根據待分離樣品的性質選擇合適的固定相(填充柱料)和移動相。
  清潔并檢測所有的管路連接,確保沒有泄漏。
  準備樣品,必要時進行預處理,如溶解、過濾等。
  系統檢查與啟動:
  開啟電腦和液相色譜儀的電源,運行控制軟件。
  檢查系統壓力是否穩定,通常初始壓力應接近0bar。
  檢查柱溫箱溫度是否達到預設值。
  系統平衡:
  以較低的流速開始泵入移動相,逐漸增加至工作流速。
  觀察壓力變化,待壓力穩定后,讓系統在工作流速下平衡一段時間,直至基線平穩。
  樣品加載:
  使用定量環或手動進樣器加載樣品。
  注意進樣量不宜過大,以免超過柱容量導致分離效果變差。
  分離過程:
  監控紫外檢測器或其他類型檢測器的輸出信號。
  調整流動相的組成和梯度,以優化分離條件。
  記錄色譜圖,根據峰型和保留時間判斷分離效果。
  收集洗脫餾分:
  通過手動或自動收集器在不同時間段收集洗脫液。
  對應于特定目標化合物的洗脫峰,應單獨收集以便后續處理。
  后處理:
  收集到的目標餾分可能需要進一步的濃縮和干燥。
  使用旋轉蒸發器或冷凍干燥機去除溶劑。
  清洗與維護:
  實驗完成后,用適當的溶劑清洗柱子和系統,保護柱子免受污染。
  定期更換流動相濾頭,以防堵塞。
  定期對系統進行維護,包括泵的保養、檢測器的校準等。
  數據分析:
  利用色譜數據處理軟件進行數據分析,計算純度和收率。
  根據結果調整分離條件,優化制備過程。
  安全注意事項:
  在整個操作過程中,要注意個人防護,避免有機溶劑接觸皮膚和吸入。
  使用易燃易揮發的有機溶劑時,要確保實驗室有良好的通風設施。
  高壓操作時需特別小心,避免高壓液體傷人。

 

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